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衣原体及检验

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衣原体是一群体积较小,能通过细菌滤器,细胞内专性寄生,并有独特发育周期的原核细胞型微生物。由于它具有一些与细菌类似的生物学特性,现归属于广义的细菌范畴。

衣原体寄生于人类、哺乳类及鸟类,仅少数致病。能引起人类致病的有沙眼衣原体、肺炎衣原体及鹦鹉热衣原体三个种。沙眼衣原体可分三个生物亚种,即沙眼生物亚种、性病淋巴肉芽肿生物亚种(LGV)及鼠生物亚种。前二个亚种对人有致病性,鼠亚种则不侵犯人类。肺炎衣原体是衣原体属中的一个新种。只有一个血清型,即TWAR组。

一、衣原体的分类和命名

1.传统的实用分类法根据衣原体的抗原构造和DNA同源性的特点,将衣原体属分为四个种,包括沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体及家畜衣原体,其中前三个种对人致病。2.按分子生物学特性的分类法该法主要是以16S和23S的rRNA基因序列进行分类,原则是从衣原体种系发生上分析和评价传统分类法。在衣原体科的水平上,可分为1~4个科。

二、生物学性状

1.发育繁殖周期与形态染色衣原体在宿主细胞内生长繁殖有独特的发育周期,可见到两种形态结构不同的颗粒。

(1)原体:呈球形或椭圆形,直径约0.3μm,外有胞壁,内含致密的核质,为成熟的衣原体。吉姆萨染色呈紫色,Macchiavello染色呈红色。在细胞外较为稳定,无繁殖能力,但有高度的感染性。

(2)网状体又称始体:呈球形或椭圆形,直径0.5~1μm,无胞壁,胞浆内无致密的核质,而有纤细的网状结构。吉姆萨染色和Macchiavello染色均呈蓝色。为衣原体发育周期中的繁殖型,代谢活泼,不能自胞外存活,无感染性。

衣原体的发育周期:原体当与易感细胞接触时,通过细胞的吞饮作用进入细胞,形成吞噬小泡。原体在泡内变软,增大为网状体。约8h后,网状体在空泡内以二分裂方式繁殖、聚集,构成各种形状的包涵体。感染18~24h后,网状体浓缩形成具有坚韧细胞壁的原体,最后随宿主细胞破裂而释出,再感染新的易感细胞,开始新的发育周期。每个发育周期约需40~72h。

2.抗原成分衣原体的抗原性相当复杂,有属、种、型等特异性抗原。衣原体细胞壁LPS为属特异性抗原,外膜蛋白包括种特异性抗原和型特异性抗原。3.分离培养特性衣原体专性细胞内寄生。绝大多数能在6~8d龄鸡胚卵黄囊中生长繁殖,并可在卵黄囊膜中找到包涵体、原体和始体颗粒,也可在传代细胞(如HeLa-等细胞株)中培养。4.抵抗力衣原体抵抗力弱,不耐热,加热50℃经30min或56~60℃5~10min可杀死,但耐寒,在冰冻条件下可存活数年。鹦鹉热衣原体比沙眼衣原体稳定。对四环素、青霉素、红霉素、螺旋霉素、利福平较敏感。

四、微生物检验

沙眼取眼穹隆部及睑结膜病灶作刮片或子宫颈炎取子宫颈刮片上皮细胞或分泌物作涂片。性病淋巴肉芽肿患者可取腹股沟淋巴结脓液或生殖道上皮细胞刮片进行涂片。鹦鹉热衣原体采取患者血液、痰或咽喉分泌物。肺炎衣原体采集痰液、鼻咽拭子分泌物。1.直接显微镜检查染色镜检,寻找上皮细胞细胞浆内的包涵体。包涵体即指在易感细胞内含增殖的始体和子代原体的空泡。根据包涵体的形态、在细胞内的位置及染色性等特性,对鉴别衣原体有意义。

(1)吉姆萨(Giemsa)染色:原体呈紫红色,始体呈蓝色,包涵体呈深紫色。沙眼衣原体包涵体密度低,呈空泡形。鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体包涵体呈深密度的卵圆形,肺炎衣原体在HeLa细胞中的包涵体形态与鹦鹉热衣原体十分相似,但不像鹦鹉热衣原体具有多形性。

(2)碘液染色:因包涵体的基质含有丰富的糖原,可被碘液染成深褐色,而细胞的其他部分呈黄色。沙眼衣原体含糖原,碘染色阳性。鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体碘染色阴性。

(3)可利用抗LPS单抗进行直接法荧光抗体染色检测上皮细胞内的衣原体抗原。

2.酶免法检测抗原。3.核酸检测采用核酸探针、PCR方法。4.分离培养各种衣原体均可在鸡胚卵黄囊和组织细胞内生长繁殖,但对鸡胚的敏感程度各有差异。将检查标本用链霉素处理后接种于鸡胚卵黄囊或传代细胞(Coy和HeLa株细胞)分离培养。用小鼠腹腔、颅内或滴鼻接种,小白鼠对不同种衣原体的敏感性不同5.检测抗体用补体结合试验、微量免疫荧光法、酶免法检测抗体。以分离鉴定衣原体。

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